5tgm1培養(yǎng)小tips

IMDM(Gibco cat:12440,或同配方) 10%胎牛血清

• 基礎培養(yǎng)基：IMDM(CellCook:CM2011或Gibco cat:C12440500BT,或同配方)

• 血清：南美胎牛血清(CellCook cat:CM1002L)

• 添加劑：\

• 配套完全培養(yǎng)基(CellCook cat:CC9099M)

• 傳代比例：維持細胞密度在1*10^5-2*10^6cells/ml

• 傳代方式：1:3傳代，離心收集(1000rpm,5分鐘)

• 換液頻率：2~3天換液1次

• 凍存液配方：RPMI 1640+10%FBS+10%DMSO

• 難度等級：+

• 培養(yǎng)要點：嚴格控制細胞密度，密度較高時容易產(chǎn)生大量細胞碎片

• 1、這株細胞好養(yǎng)嗎？長得快嗎？

答：這株細胞培養(yǎng)難度系數(shù)不高，比較好養(yǎng)，狀態(tài)密度正常情況下長得還是比較快的，狀態(tài)較好1-2天也能達到傳代密度。

• 2、細胞狀態(tài)差是怎么樣的？怎樣算狀態(tài)差？

答：細胞變黑，折光度變差，有裂解傾向，死細胞變多，碎片雜質(zhì)變多，培養(yǎng)液變渾濁，細胞不聚團。例如下圖細胞真菌污染后的狀態(tài)：

 

• 3、細胞密度很低不聚團、生長慢怎么辦？

答:①豎瓶培養(yǎng)。豎瓶可以提高細胞密度促進細胞生長，將培養(yǎng)瓶豎置時需注意吹下培養(yǎng)瓶底部的細胞，避免細胞殘留，密度起來后恢復水平放置，以保持一定氣液比保證細胞呼吸，避免長期豎瓶讓細胞出現(xiàn)傳質(zhì)問題；

②提高血清濃度到15%調(diào)整細胞狀態(tài)；

③傳代密度不要太低，控制好傳代比例。

• 4、這株細胞什么時候可以傳代呢？該怎么傳代呢？

答：懸浮細胞是否能傳代主要通過細胞計數(shù)看細胞密度來判斷。懸浮細胞常規(guī)推薦接種密度為3-5×10⁵cell/mL，生長到2×10⁶cell/mL左右可繼續(xù)傳代。正常情況下可通過離心（800-1000rpm，5min）收集1:3傳代。（這株細胞需要注意控制細胞密度，有一定密度依賴，細胞狀態(tài)不好密度太低可能會不增殖，密度太高時容易產(chǎn)生大量碎片）.

• 5、細胞剛復蘇狀態(tài)不好怎么辦？

答：復蘇第二天如果細胞狀態(tài)不行可以補加血清、因子調(diào)整，如果細胞狀態(tài)實在太差死細胞及細胞碎片比較多，細胞生長環(huán)境太差可以考慮先離心去除細胞碎片，換新鮮培養(yǎng)基及提高血清濃度培養(yǎng)觀察細胞狀態(tài)（看情況，懸浮細胞復蘇三天內(nèi)一般不建議離心換液）。

很多懸浮細胞剛復蘇時活力是相對較差的，此時我們需要給點耐心，等待細胞完成自我修復進入對數(shù)增長期。比如THP-1復蘇后往往需要7-10天的恢復期，Jurkat，Clone E6-1復蘇后也需要5-7天才能恢復狀態(tài)。很多新手在此期間容易失去信心就直接放棄培養(yǎng)了，還是需要多一點耐心哦！