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      技術(shù)資訊技術(shù)資料
      貼壁懸浮混合型細胞--培養(yǎng)方法及注意事項
      發(fā)布日期:2023.05.06

       

      細胞類型有三種:貼壁細胞、懸浮細胞、貼壁懸浮混合型細胞。

       

       

      01
      貼壁懸浮混合型細胞

      是指在細胞培養(yǎng)過程中,部分細胞貼壁生長,部分細胞懸浮生長,稱為貼壁懸浮混合型細胞。

       
      02
      常見的貼壁懸浮混合型細胞

      LLC(小鼠Lewis肺癌細胞)、BV2(小鼠小膠質(zhì)細胞)、PC3(人前列腺癌細胞)、NR8383(大鼠肺泡巨噬細胞)、SP2/0-Ag14(小鼠骨髓瘤細胞)、COLO 205(人結(jié)腸癌細胞)等。

       

       

       
      Cellcook BV2細胞圖片
       

       

      圓形細胞為懸浮細胞,不規(guī)則型細胞為貼壁細胞。

       
       
       
      Cellcook COLO 205細胞圖片
       

      大部分圓形懸浮細胞,少量圓形貼壁細胞。
       


      細胞培養(yǎng)

       

       

       

      補液/換液

      補液:細胞量較少時直接補加1-2mL新鮮的完全培養(yǎng)基即可。

      換液:細胞量較多但不夠傳代時,2-3天離心換液一次。
       

       

       
      傳代
       

      用移液槍吸出培養(yǎng)液(含懸浮的細胞)轉(zhuǎn)移到無菌離心管中;

      貼壁部分:用1mL PBS洗細胞,吸出PBS放入到第1步裝有培養(yǎng)液的離心管中收集(不要直接丟棄,里面有細胞);

      加入1mL 0.25%胰酶EDTA溶液,傾斜晃勻,吸去大部分胰酶,覆蓋所有細胞后置于37℃培養(yǎng)箱靜置消化,具體消化時間參考說明書結(jié)合細胞生長情況而定。

      顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞皺縮變圓后,傾斜培養(yǎng)瓶,細胞呈流沙狀完全脫落,即可判斷細胞消化完成。

      用2mL完全培養(yǎng)基終止消化,沿瓶壁將細胞輕柔吹落,均勻吹散。將消化下來的細胞懸液吹散細胞后收集到第1步的離心管;

      將離心管在1000rpm 5min離心,離心完畢棄掉上清,加入新鮮的完全培養(yǎng)基重懸,按實際情況分瓶,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

       

       

       


      注意事項

       

       

       

       
      01

      在操作過程中,丟棄一個液體前都要想一下里面有沒有可能有細胞,避免丟失細胞。

       
      02

      細胞種類、細胞密度、細胞狀態(tài)、甚至胰酶的品牌,均影響到細胞的消化時間,所以消化的時候不要只看時間,以顯微鏡下細胞的狀態(tài)來確定消化終點,部分難消化的細胞消化時間甚至可以長達15分鐘。

       
       
      03

      細胞的傳代比例通常說的是等體積的容器,不同容器需要換算;例如:一個T25培養(yǎng)瓶的細胞傳到一個10cm培養(yǎng)皿里面,雖然是1傳1,但是比例可不是1:1;T25瓶底面積25cm²,10cm培養(yǎng)皿底面積約為55cm²(10cm的培養(yǎng)皿指的是培養(yǎng)皿的外徑,而培養(yǎng)皿的內(nèi)徑約為8.4cm,故根據(jù)內(nèi)徑可求出其底面積為55cm²),所以實際傳代比例為1:2.2。

       

       

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