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圖1：ATCC中293T細(xì)胞形態(tài)
293T細(xì)胞中轉(zhuǎn)入SV40T-ANTIGEN基因形成的高轉(zhuǎn)染效率衍生株，即為293T細(xì)胞系。包含SV40-ORI的質(zhì)粒能夠在該細(xì)胞系中顯著擴(kuò)增，從而促進(jìn)表達(dá)載體的擴(kuò)增，促進(jìn)蛋白的表達(dá)。293T細(xì)胞除了可用于各類基因表達(dá)及蛋白生產(chǎn)，還可用于高滴度逆轉(zhuǎn)錄病毒及其他病毒生產(chǎn)，如腺病毒及其他哺乳動(dòng)物病毒。
本文為大家介紹293T的培養(yǎng)條件及注意事項(xiàng)：
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圖2：293T細(xì)胞形態(tài)
細(xì)胞特性
培養(yǎng)條件
培養(yǎng)體系
DMEM,HIGH GLUCOSE(GIBCO CAT:11995,或同配方) +10%胎牛血清(南美級(jí)別）
傳代比例
1:3-1:5傳代（培養(yǎng)面積比）
注：可根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需細(xì)胞量對(duì)傳代比例進(jìn)行調(diào)整，但不可過(guò)低，細(xì)胞密度太低時(shí)生長(zhǎng)緩慢。
傳代方式
消化30s
換液頻率
2~3天換液1次
注：培養(yǎng)基變黃時(shí)需及時(shí)換液。
凍存液配方
DMEM,HIGH GLUCOSE+10%FBS+10%DMSO
培養(yǎng)要點(diǎn)
圖3：客戶培養(yǎng)的293T（僅供學(xué)習(xí)參考)
問(wèn)題一
為啥293T細(xì)胞傳代后聚團(tuán)嚴(yán)重？
答：
● 胰酶消化操作不當(dāng)導(dǎo)致細(xì)胞聚團(tuán)。
● 消化過(guò)度或吹打過(guò)猛導(dǎo)致細(xì)胞受傷嚴(yán)重，破損的細(xì)胞碎片容易粘連聚團(tuán)。
● 消化時(shí)細(xì)胞融合率太高，成片脫落，將不容易被吹散，容易聚團(tuán)。
● 鑒于該細(xì)胞貼壁疏松，普通0.25%胰酶消化時(shí)間控制30s-60s；吹打動(dòng)作輕柔，充分分散；細(xì)胞融合率達(dá)到80%-90%即可傳代，不可長(zhǎng)的太滿。
問(wèn)題二
為啥293T換了血清批次后聚團(tuán)嚴(yán)重？
答：
● 血清批次間存在差異。293T細(xì)胞本身有聚團(tuán)生長(zhǎng)特性，但嚴(yán)重聚團(tuán)可能是由于受到血清里的某些因子刺激。
● 先用血清試用裝，試用效果好，可購(gòu)買和血清試用裝批次相同的正裝，有效避免批間差對(duì)細(xì)胞的影響。
圖4：客戶培養(yǎng)的293T（僅供學(xué)習(xí)參考)
問(wèn)題三
為啥293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染病毒后凋亡嚴(yán)重？
答：
● 在排查了方法步驟和轉(zhuǎn)染試劑，依然沒(méi)有改善的情況下，可排查一下轉(zhuǎn)染前的營(yíng)養(yǎng)體系，尤其是血清批間差帶來(lái)的影響。很多同學(xué)說(shuō)前期培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)正常呀，其實(shí)細(xì)胞形態(tài)學(xué)只是鑒別細(xì)胞是否健康的一個(gè)外在指標(biāo)，還要結(jié)合細(xì)胞其它指標(biāo)對(duì)細(xì)胞健康進(jìn)行評(píng)定（比如倍增時(shí)間，存活率）。
● 通過(guò)更換血清批次，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)并觀察轉(zhuǎn)染后的效果，比較分析出原因。
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