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      技術資訊技術資料
      細胞鋪板|鋪勻不同規(guī)格孔板細胞小技巧
      發(fā)布日期:2022.11.01

      提到細胞生物學實驗,最基礎的恐怕就是seeding cells了吧,把用于實驗的細胞鋪的均勻且密度適宜,不僅在看起來賞心悅目,更是決定了實驗結(jié)果的穩(wěn)定性。

      從10cm dish到96孔板,難度逐步增加~ ~ 在這里我以293T細胞為例。

       

       

       

      均勻接種通關手冊

       

       

      NO.1

       

      10cm dish 

       

       
       
       
       
       

       

       

      均勻接種

      通關秘籍:

      1、dish緊貼,緊貼你的實驗臺;前前后后,左左右右晃起來;

      前后前后前后前后左右左右左右

      2、10cm dish可以晃得慢一點,想象你的手里dish中不是培養(yǎng)基,而是,海浪!~~~~~~

      輕柔且緩慢,10次重復即可。

      記得顯微鏡下觀察哦,推薦4x物鏡~~~,不滿意就再加一個循環(huán),切記請勿用力過猛將液體灑出來喲。

       
       

       

      NO.2

      6cm dish

       
       
       
       
       
       

      均勻接種

      通關秘籍:
      1、參照10cm dish,速度加1擋;比如說之前你一個前后左右要2s,現(xiàn)在換成1s。

      記得顯微鏡下觀察哦,推薦4x物鏡~~~,不滿意就再加一個循環(huán),切記請勿用力過猛將液體灑出來喲。

       

        
       

       

       

      NO.3

       3.5cm dish/6孔板

       
       
       
       
       

       

       

       

      均勻接種

      通關秘籍:
      1、3.5cm  dish和6孔板的一個孔在規(guī)格上是一樣的,可以將前后左右的幅度再大一些,比如6cm dish你的一個前后跨度5cm,現(xiàn)在換成10cm,速度加檔相比6cm dish加0.5檔。

      記得顯微鏡下觀察哦,推薦4x物鏡~~~,不滿意就再加一個循環(huán),切記請勿用力過猛將液體灑出來喲。

       

       

       

      NO.4

      12孔板-24孔板

       
       
       
       
       

       

       

      均勻接種

       

      通關秘籍:
      1、再劇烈一點,切記請勿用力過猛將液體灑出來喲。

       

       

       

      NO.5

       48孔板

       
       
       
       
       

       

       

       

       

      均勻接種

      通關秘籍:
      1、一般到48孔板就不推薦上下左右了,不是說這種方法不行,而是不太好操作,得稍微老一點的手。

      推薦使用以下兩種方法中的一個或聯(lián)合使用:

       

       
       
      方法一
       

      輕拍孔板邊緣!加入200-500μL左右細胞懸液,左手或右手水平持板,沿著4條邊 依次輕拍數(shù)下,不要拘泥于拍順序和位置,以鏡下均勻為準。

       
       
       
      方法二
       

      預加培養(yǎng)基,再滴加細胞懸液!若是你想要每孔盛500μL media,你可以先放4/5的media,也就是400μL,再把你要的細胞懸浮成100μL,使用移液槍,垂直于平板緩慢滴加到板中央即可,只要夠垂直和居中,一般不需要搖晃或者拍板就可以非常均勻。

       

       

       

      NO.6

      96孔板

       
       
       
       
       

       

       

      均勻接種

      通關秘籍:
      1、到96孔不建議搖晃和拍板,不是說不行,難度比較大了。
      建議使用48孔板(第5關)的方法二,把各個體積縮小一半,也就是50μL,滴加到200μL中,若是滴不出,也可以使液滴接觸培養(yǎng)基平面使兩者匯合。
       

       

       

       

      接種數(shù)目通關手冊

       

       

       

       

       

      接種數(shù)目

       
      比6cm dish小的孔板,都可以預先添加一定體積的PBS或培養(yǎng)基濕潤孔板,以使其變得親水。

       

      接種數(shù)目以293T細胞為例:
      1】10cm:300-500萬;相當于10cm dish 80%匯合時1:4或1:5傳代的效果;

      【2】6cm:120-200萬;其底面積為10cm的1/2.5;

      【3】3.5cm/6孔板:60-80萬;

      【4】12孔板:20-30萬;

      【5】24孔板:10-15萬;

      【6】48孔板:5-8萬;

      【7】96孔板:3-5萬。

      020-89449936/19303062859
      • [email protected]
      • 廣州市海珠區(qū)廣州國際生物島標產(chǎn)一期辦公區(qū)一棟102-104單元
      友情鏈接: ATCC DSMZ Cellosaurus JCRB 中國典型培養(yǎng)物保藏中心 中國國家實驗細胞資源共享服務平臺
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