提到細胞生物學實驗,最基礎的恐怕就是seeding cells了吧,把用于實驗的細胞鋪的均勻且密度適宜,不僅在看起來賞心悅目,更是決定了實驗結(jié)果的穩(wěn)定性。
從10cm dish到96孔板,難度逐步增加~ ~ 在這里我以293T細胞為例。
均勻接種通關手冊
NO.1
10cm dish
均勻接種

通關秘籍:
1、dish緊貼,緊貼你的實驗臺;前前后后,左左右右晃起來;
前后前后前后前后左右左右左右
2、10cm dish可以晃得慢一點,想象你的手里dish中不是培養(yǎng)基,而是,海浪!~~~~~~
輕柔且緩慢,10次重復即可。
記得顯微鏡下觀察哦,推薦4x物鏡~~~,不滿意就再加一個循環(huán),切記請勿用力過猛將液體灑出來喲。
NO.2
6cm dish
均勻接種

通關秘籍:
1、參照10cm dish,速度加1擋;比如說之前你一個前后左右要2s,現(xiàn)在換成1s。
記得顯微鏡下觀察哦,推薦4x物鏡~~~,不滿意就再加一個循環(huán),切記請勿用力過猛將液體灑出來喲。
NO.3
3.5cm dish/6孔板
均勻接種

通關秘籍:
1、3.5cm dish和6孔板的一個孔在規(guī)格上是一樣的,可以將前后左右的幅度再大一些,比如6cm dish你的一個前后跨度5cm,現(xiàn)在換成10cm,速度加檔相比6cm dish加0.5檔。
記得顯微鏡下觀察哦,推薦4x物鏡~~~,不滿意就再加一個循環(huán),切記請勿用力過猛將液體灑出來喲。
NO.4
12孔板-24孔板
均勻接種

通關秘籍:
1、再劇烈一點,切記請勿用力過猛將液體灑出來喲。
NO.5
48孔板
均勻接種

通關秘籍:
1、一般到48孔板就不推薦上下左右了,不是說這種方法不行,而是不太好操作,得稍微老一點的手。
推薦使用以下兩種方法中的一個或聯(lián)合使用:
輕拍孔板邊緣!加入200-500μL左右細胞懸液,左手或右手水平持板,沿著4條邊 依次輕拍數(shù)下,不要拘泥于拍順序和位置,以鏡下均勻為準。
預加培養(yǎng)基,再滴加細胞懸液!若是你想要每孔盛500μL media,你可以先放4/5的media,也就是400μL,再把你要的細胞懸浮成100μL,使用移液槍,垂直于平板緩慢滴加到板中央即可,只要夠垂直和居中,一般不需要搖晃或者拍板就可以非常均勻。
NO.6
96孔板
均勻接種

1、到96孔不建議搖晃和拍板,不是說不行,難度比較大了。
接種數(shù)目通關手冊
接種數(shù)目

接種數(shù)目以293T細胞為例:
【1】10cm:300-500萬;相當于10cm dish 80%匯合時1:4或1:5傳代的效果;
【2】6cm:120-200萬;其底面積為10cm的1/2.5;
【3】3.5cm/6孔板:60-80萬;
【4】12孔板:20-30萬;
【5】24孔板:10-15萬;
【6】48孔板:5-8萬;
【7】96孔板:3-5萬。
























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