MEM(CellCook cat:CM2015,或同配方) 10%胎牛血清(CellCook cat:CM1002L,或更高級(jí)別) 添加劑:10ug/ml胰島素(CellCook cat:CM1007)，1X 非必需氨基酸(CellCook cat:CM1008S/L)

不高于1:3傳代（培養(yǎng)面積比）

消化3-5分鐘

每周換液2-3次

MEM+10%FBS+10ug/ml胰島素+1X 非必需氨基酸+10%DMSO

該細(xì)胞是從一名69歲的白人女性乳腺癌患者的胸腔積液中分離建立的。該細(xì)胞保留了多個(gè)分化乳腺上皮的特性，包括：能通過胞質(zhì)雌激素受體加工雌二醇并能形成隆突結(jié)構(gòu)（domes）；該細(xì)胞表達(dá)WNT7B癌基因；TNF-α可以抑制MCF-7細(xì)胞的生長；抗雌激素處理能調(diào)節(jié)細(xì)胞胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白（IGFBP）的分泌。

藥篩：通過慢病毒感染的方式將攜帶熒光素酶（Luciferase,Luc）的基因片段整合進(jìn)細(xì)胞基因組，使細(xì)胞表達(dá)熒光蛋白，常用于構(gòu)建各類皮下、原位或轉(zhuǎn)移型的CDX腫瘤模型、活體動(dòng)物體內(nèi)光學(xué)成像實(shí)驗(yàn)和啟動(dòng)子活性分析等。由于是用慢病毒轉(zhuǎn)染的方式，導(dǎo)致細(xì)胞熒光表達(dá)量的不確定性，為增強(qiáng)細(xì)胞熒光表達(dá)量可進(jìn)行抗性篩選。熒光株培養(yǎng)條件與野生型細(xì)胞一致。連續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞篩選頻率為1-2個(gè)月，篩選時(shí)，將嘌呤霉素直接添加到培養(yǎng)基中，細(xì)胞正常培養(yǎng)傳代即可，每次篩選時(shí)間為一周，嘌呤霉素終濃度為4μg/mL。長期凍存的細(xì)胞，復(fù)蘇后第二代待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定時(shí)，可進(jìn)行篩選，維持陽性細(xì)胞比例。篩選過程中，建議不要使用細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)，抗生素會(huì)影響部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果。