最近收到了很多大家反饋的細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題，今天結(jié)合多年實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)和細(xì)胞培養(yǎng)指南，為大家講述細(xì)胞從復(fù)蘇、傳代到凍存等一系列過(guò)程及常遇到的難題和小細(xì)節(jié)。
◆ 如何查找細(xì)胞培養(yǎng)條件和細(xì)胞的來(lái)源等信息？
不同細(xì)胞的培養(yǎng)基是不同的。ATCC等官方數(shù)據(jù)庫(kù)針對(duì)不同細(xì)胞株，會(huì)有詳細(xì)介紹，包括：培養(yǎng)基的類型、培養(yǎng)條件、細(xì)胞來(lái)源、生長(zhǎng)的狀態(tài)圖等?？梢栽谫?gòu)買細(xì)胞前查找相關(guān)信息，挑選符合實(shí)驗(yàn)研究的細(xì)胞系，做好充分準(zhǔn)備。
◆ 大多數(shù)細(xì)胞系可以在不止一種培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，那可以替換嗎?
不建議突然更換培養(yǎng)基，當(dāng)培養(yǎng)條件改變時(shí)，細(xì)胞形態(tài)狀態(tài)會(huì)發(fā)生很大的變化，如果一定要更換培養(yǎng)基，可以做平行測(cè)試再?zèng)Q定是否可以更換。
◆ 培養(yǎng)基為什么一般都是偏紅色?
因?yàn)榕囵B(yǎng)基加了酚紅作指示劑，指示pH范圍為6~8，培養(yǎng)基偏酸則發(fā)黃，偏堿則發(fā)紫，需要及時(shí)換液，更換新鮮的培養(yǎng)基，以維持細(xì)胞良好的生長(zhǎng)環(huán)境。一些特殊的細(xì)胞需要用無(wú)酚紅的培養(yǎng)基，需要及時(shí)觀察細(xì)胞。
◆ 為什么細(xì)胞復(fù)蘇后，很多難以貼壁?
可能是細(xì)胞凍存時(shí)狀態(tài)差或者復(fù)蘇時(shí)動(dòng)作太慢導(dǎo)致細(xì)胞死亡。切記融化速度要快，也要離心去掉DMSO。若未貼壁的細(xì)胞依然存活，可以離心收集重新接種回原瓶中，并調(diào)整血清比例至15%輔助貼壁培養(yǎng)。
◆ 為什么傳代或復(fù)蘇后細(xì)胞貼壁了，卻長(zhǎng)不起來(lái)?
可能是細(xì)胞密度的問(wèn)題，一些細(xì)胞傾向于維持一定的密度生長(zhǎng)，若細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，可將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到較小的培養(yǎng)瓶/皿中培養(yǎng)或提高血清比例培養(yǎng)。
◆ 有必要每天觀察細(xì)胞嗎?
一般的腫瘤細(xì)胞我們是隔天傳代，但是切不可忽略對(duì)細(xì)胞的觀察，每天都要觀察：肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況等。有一些細(xì)胞完全攤開需要一定的時(shí)間，在未貼壁前減少挪動(dòng)觀察，有助于貼壁。
◆ 幾天換培養(yǎng)基?
正常情況下，培養(yǎng)液偏紅色。如果細(xì)胞維持在pH6.5～6.6條件下，培養(yǎng)基變黃，說(shuō)明培養(yǎng)液中代謝產(chǎn)物已堆積到一定量，細(xì)胞會(huì)脫落死亡，需要更換新鮮培養(yǎng)液。一般細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛時(shí)1～2天換一次，生長(zhǎng)緩慢時(shí)，3～4天亦可。
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