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      技術(shù)資訊技術(shù)資料
      細胞學(xué)堂 |如何培養(yǎng)人正常支氣管上皮細胞BEAS-2B
      發(fā)布日期:2023.03.24

       

       
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      圖1:ATCC中BEAS-2B的細胞形態(tài)

       

       
       
       

      BEAS-2B細胞從一位非癌個體的正常人支氣管上皮病理切片分離,經(jīng)過腺病毒12-SV40雜交病毒感染并篩選克隆建成永生化細胞系。BEAS-2B細胞保留了對血清反應(yīng)進行鱗狀分化的能力,并用于篩選誘導(dǎo)或影響分化及致癌的化學(xué)或生物制劑。PS:細胞角蛋白及SV40抗原染色陽性。

       
       

       

      本文為大家介紹BEAS-2B的

      培養(yǎng)條件及注意事項

      圖2:BEAS-2B的細胞形態(tài)

       

       

       
       
      培養(yǎng)條件

       

       

       
      ★ 生長特性:貼壁

        形態(tài)特征:上皮細胞樣

       培養(yǎng)條件:BEGM培養(yǎng)基 

       傳代比例:1:4傳代(培養(yǎng)面積比),推薦初始密度為1500-3000細胞/CM2,在細胞完全匯合前傳代,防止細胞鱗狀分化。傳代時應(yīng)嚴格控制密度,最少不能低于60%,最高不超過80%。

        傳代方式:胰酶(0.25%Typsin+0.53 mM EDTA +0.5%POLYVINYLPYR-ROLIDONE (PVP))消化2分鐘

        換液頻率:2~3天換液1次
       凍存液配方:89%BEGM +10% DMSO+1% PVP

       

       

       
       
      注意事項

       

       

       1

      使用無血清培養(yǎng)基BEGM培養(yǎng),效期2個月。

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      消化條件:無鈣、鎂離子的PBS清洗細胞后,加1mL胰酶,胰酶潤洗細胞表面3-4次后,吸走胰酶,放入37℃培養(yǎng)箱消化2分鐘左右。(具體消化時間請在拿到細胞前2次傳代時,及時觀察,以實際情況為主。)

       

       

       

       

      3

      終止消化時,用1mL胰蛋白酶抑制劑(2.5mg/ mL)終止,離心去上清,然后用3mL PBS再次清洗細胞,離心收集后,用新的培養(yǎng)基重懸后鋪板(消化過程中,不要拍瓶身,振蕩可促使細胞聚團。) 

      4

      注意:80%左右匯合度時傳代,完全匯合會使細胞末端分化。

      5

      剛復(fù)蘇要使用提前用包被液包被過的培養(yǎng)器皿(包被液配方:0.01mg/mL 黏連蛋白、0.03 mg/mLⅠ型膠原和0.01mg/mL BSA),以增加細胞貼附。培養(yǎng)器皿提前使用包被液處理,包被時間至少4小時,建議過夜。

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      包被液使用方法:加2-3mL到T25培養(yǎng)瓶(3-4mL到10cm培養(yǎng)皿),放無菌環(huán)境中,擰上蓋子,自然風干。

       

       

       

       

       

       

       

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      復(fù)蘇后的傳代培養(yǎng)過程中可不做包被處理,細胞可正常貼壁。

       

       

       

       

       

       

       

       

       

       

       
       
      血清對細胞的影響
       
       
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      用不含血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)時,BEAS-2B細胞具有典型的呼吸上皮細胞多邊形態(tài);用含血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)時,密度低時細胞形態(tài)會呈長梭型,但密度高一些以后形態(tài)會變短。

       

       

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      圖3源來自文獻

       

          通過比較有/無FBS培養(yǎng)的BEAS-2B的全基因組基因表達情況,發(fā)現(xiàn)部分生物途徑發(fā)生了基因表達變化,主要包括致癌和能量代謝有關(guān)的途徑。 

       

          實驗實時測量BEAS-2B的氧消耗和糖酵解,發(fā)現(xiàn)FBS培養(yǎng)的細胞總糖酵解能力增加了1.4倍,基礎(chǔ)呼吸增加了1.9倍,產(chǎn)生ATP所消耗的氧氣增加了2.0倍;與不使用FBS培養(yǎng)的BEAS-2B相比,最大呼吸量增加了2.8倍。

       

         43%的亞砷酸鹽調(diào)節(jié)基因在mRNA水平上受到胎牛血清的調(diào)節(jié)。

       

          細胞毒性研究顯示,暴露在5%的FBS中8周的BEAS-2B細胞對亞砷酸鹽的細胞毒性的敏感性幾乎是不接觸FBS的BEAS-2B細胞的5倍。

       

          胎牛血清誘導(dǎo)的BEAS-2B的表型變化表明,在使用BEAS-2B作為砷毒性的實驗?zāi)P蜁r ,應(yīng)仔細考慮培養(yǎng)條件。

       

       

      [1]Zhao F ,  Klimecki W T . Culture conditions profoundly impact phenotype in BEAS‐2B, a human pulmonary epithelial model[J]. Journal of Applied Toxicology Jat, 2015, 35(8):945-951.  

       DOI:10.1002/jat.3094

      [2]Li T, Liu Y, Xu W, et al. Polydatin mediates Parkin-dependent mitophagy and protects against mitochondria-dependent apoptosis in acute respiratory distress syndrome[J]. Laboratory Investigation, 2019, 99(6): 819-829. 

      DOI:10.1038/s41374-019-0191-3 

      (此文獻Beas-2B細胞購自賽庫生物)

      [3]Tan H W, Liang Z, Yao Y, et al. Lasting DNA Damage and Aberrant DNA Repair Gene Expression Profile Are Associated with Post-Chronic Cadmium Exposure in Human Bronchial Epithelial Cells[J]. Cells, 2019, 8(8).  

      DOI:10.3390/cells8080842 

      (此文獻Beas-2B細胞購自賽庫生物)

      [4]Li X, Jia Y, Nan A, et al. CircRNA104250 and lncRNAuc001.dgp.1 promote the PM2.5-induced inflammatory response by co-targeting miR-3607-5p in BEAS-2B cells[J]. Environmental Pollution, 2020. 

      DOI:10.1016/j.envpol.2019.113749

       (此文獻Beas-2B細胞購自賽庫生物)

      [5] Jia Y ,  Li X ,  Nan A , et al. Circular RNA 406961 interacts with ILF2 to regulate PM2.5-induced inflammatory responses in human bronchial epithelial cells via activation of STAT3/JNK pathways[J]. Environment International, 2020, 141:105755.   

      DOI:10.1016/j.envint.2020.105755 

      (此文獻Beas-2B細胞購自賽庫生物)

       
       
       

       


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