賽庫(kù)細(xì)胞接收操作說(shuō)明

非常感謝各位老師及各位同學(xué)對(duì)我們賽庫(kù)生物的信任，我司自始至終致力于為客戶提供細(xì)胞整體解決方案。

收到細(xì)胞后先查看細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞類(lèi)型、培養(yǎng)條件等基本信息，檢查細(xì)胞培養(yǎng)基是否變色、觀察T25培養(yǎng)瓶是否破損、漏液并在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，拍照（100x、200X)以做留底。將細(xì)胞放入培養(yǎng)箱靜置2-4h。

貼壁細(xì)胞

經(jīng)物流運(yùn)輸，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶底脫落下來(lái)，顯微鏡下拍照觀察可見(jiàn)存在部分懸浮的細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)塊。

將懸浮的細(xì)胞收集離心，使用0.25%胰酶消化后，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，并使用含15%血清的新鮮完全培養(yǎng)基培養(yǎng)3天;同時(shí)對(duì)原培養(yǎng)瓶中剩余仍然貼壁的細(xì)胞則同樣更換含15%血清的新鮮完全培養(yǎng)基，在原瓶中培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞均未增殖且出現(xiàn)狀態(tài)變差或脫落凋亡現(xiàn)象，煩請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞照片反饋，我們將繼續(xù)跟進(jìn)。

注:以上說(shuō)明針對(duì)完全培養(yǎng)基所含血清濃度為10%的培養(yǎng)條件，若培養(yǎng)條件為20%血清濃度，則可增加至25%血清濃度，以此類(lèi)推。其體情況以細(xì)胞說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

若收到細(xì)胞時(shí)無(wú)特殊情況出現(xiàn)，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞匯合度后進(jìn)行處理:

匯合度未超過(guò)80%時(shí),使用巴氏吸管或玻璃吸管將培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基吸出，同時(shí)留存6mL左右（需根據(jù)說(shuō)明書(shū)記載的培養(yǎng)條件的血清濃度補(bǔ)加血清）繼續(xù)培養(yǎng);

匯合度超過(guò)80%時(shí)，請(qǐng)按照細(xì)胞培養(yǎng)條件進(jìn)行傳代培養(yǎng)。初次傳代建議按照培養(yǎng)器皿底面積比1:2進(jìn)行傳代。

懸浮細(xì)胞

懸浮細(xì)胞經(jīng)過(guò)物流運(yùn)輸后有可能產(chǎn)生細(xì)胞碎片或發(fā)生凋亡，此時(shí)請(qǐng)?jiān)谂恼蘸髮⒓?xì)胞離心收集，使用新鮮的完全培養(yǎng)基(可選擇增加血清濃度5%）重懸并轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)皿/瓶中繼續(xù)培養(yǎng)3天;3天后若細(xì)胞狀態(tài)未有明顯改善，而是停止增殖持續(xù)凋亡，煩請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞照片反饋,我們將繼續(xù)跟進(jìn)。

若收到細(xì)胞時(shí)無(wú)特殊情況出現(xiàn)，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)后進(jìn)行處理:

將培養(yǎng)瓶豎立放置1h，待細(xì)胞沉降至瓶底，使用巴氏吸管或玻璃吸管將培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基吸出，同時(shí)留存6mL左右（需根據(jù)說(shuō)明書(shū)記載的培養(yǎng)條件的血清濃度補(bǔ)加血清），橫放培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng);

培養(yǎng)至細(xì)胞數(shù)量（建議進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)）達(dá)到說(shuō)明書(shū)記載的傳代標(biāo)準(zhǔn)后，請(qǐng)按照細(xì)胞培養(yǎng)條件進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

注:懸浮細(xì)胞有最適增長(zhǎng)密度，具體請(qǐng)查詢細(xì)胞說(shuō)明書(shū)或提前咨詢。

常見(jiàn)問(wèn)題Q&A

Q:培養(yǎng)基到底要不要加雙抗〔青霉素&鏈霉素，Penicillin +Streptomycin) ?

A:雙抗不是細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的。我司培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)均不常規(guī)使用抗生素。同時(shí)應(yīng)考慮到長(zhǎng)期使用抗生素后可能會(huì)促使抗生素耐藥的微生物產(chǎn)生，從而導(dǎo)致輕度污染持續(xù)存在。一旦停止加入抗生素，輕度污染極有可能發(fā)展成大規(guī)模污染。

請(qǐng)根據(jù)各自實(shí)驗(yàn)室的具體情況，自行決定是否使用雙抗。

Q:培養(yǎng)過(guò)程中能更換成其它種類(lèi)的培養(yǎng)基嗎?

A:我們強(qiáng)烈建議使用細(xì)胞提供機(jī)構(gòu)或國(guó)際權(quán)威細(xì)胞庫(kù)推薦的培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)。不排除部分細(xì)胞能夠在不同培養(yǎng)條件下正常生長(zhǎng)，此時(shí)建議在使用推薦培養(yǎng)條件做好保種或細(xì)胞維持的情況下，分離部分細(xì)胞進(jìn)行測(cè)試后決定是否更改培養(yǎng)條件。

我司同時(shí)推出一系列經(jīng)過(guò)測(cè)試的細(xì)胞完全培養(yǎng)基供您訂購(gòu)。

Q:細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)碎片如何處理?

A:貼壁細(xì)胞在移除原培養(yǎng)基后，用PBS液潤(rùn)洗2-3遍;懸浮細(xì)胞經(jīng)高心移除原培養(yǎng)基后，加入適量PBS進(jìn)行重懸，再離心去除PBS;一般建議重復(fù)上述步驟2-3遍，800-1000rpm離心3-5分鐘。